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    幫助中心-北京博奧森生物技術有限公司
    Western Blotting 問題解答
    1、膠片上存在反轉印象(如:亮的條帶、黑的背景)?

    原因:HRP的濃度過高;

    解決:稀釋HRP至少10倍。

    2、膜上有黃色或棕色的沉積?

    原因:HRP的濃度過高;

    解決:稀釋HRP至少10倍。

    3、在暗室中條帶過于明亮?

    原因:HRP的濃度過高;

    解決:稀釋HRP至少10倍。

    4、條帶的發光時間持續了至少8小時?

    原因:HRP的濃度過高;

    解決:稀釋HRP至少10倍。

    5、信號太弱或沒有?

    原因:

    1.太多的HRP積聚導致信號快速的消退;

    2.抗原或抗體的濃度不夠;

    3.轉印不成功;

    4.HRP或其他底物的效價降低。

    解決:

    1.稀釋HRP至少10倍;

    2.增加其濃度;

    3.尋找合適的轉移方法和條件;

    4.選擇其他的合適底物。

    6、背景高?

    原因:

    1.HRP濃度過高;

    2.封閉無效;

    3.不適合的封閉試劑;

    4.洗滌不充分和洗滌液的量;

    5.膠片曝光過度;

    6.抗原或抗體的濃度太高。

    解決:

    1.稀釋HRP至少10倍;

    2.尋找合適的封閉方法;

    3.選用其他的封閉試劑;

    4.增加洗滌的時間,次數;

    5.減少曝光時間;

    6.稀釋抗原或抗體。

    7、蛋白質條帶上有空泡影像?

    原因:

    1.蛋白質沒有被充分轉??;

    2.膜沒有預先浸濕;

    3.在膠片和膜之間有氣泡。

    解決:

    1.尋找合適的轉移方法和條件;

    2.在轉印前充分浸濕;

    3.在暴光之前趕走氣泡。

    8、膠片上背景彌散?

    原因:HRP標記的抗體出現了積聚;

    解決:稀釋HRP至少10倍。

    9、無特異性條帶?

    原因:

    1.HRP濃度過高;

    2.SDS促使非特異蛋白質條帶黏附在目的蛋白質條帶上。

    解決:

    1.稀釋HRP至少10倍;

    2.在操作過程中不要加SDS。

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